微量細胞WGBS技術揭示克隆胚胎異常

　　單細胞及微量樣品的DNA甲基化組織學研究在很大程度上受到建倉測序技術的制約。傳統的文庫構建方法或與基因組DNA相似的單細胞擴增技術很難應用于甲基化實驗過程。異性基因可以建立基于線性擴增和單一官倉的技術，從而充分降低文庫偏好，正確完成珍貴樣品的全基因組甲基化研究。下面WGBS廠家詳細為大家介紹。

　　實驗結果：

　　1.不同發展潛力的SCNT胚胎間DNA甲基化

　　研究人員利用微量細胞全基因組中亞硫酸鹽測序(scWGBS)技術，在移植具有不同細胞發育命運的克隆胚胎之前的發育過程中繪制了全基因組、單堿基分辨率DNA甲基化圖。獲得了從供體卵細胞到囊胞的SCNT胚胎的WGBS數據，并與先前研究中修改后的胚胎的WGBS數據進行了比較，結果表明，SCNT胚胎組中全基因組超DNA甲基化模式存在，不完全DNA去甲基化可能與SCNT胚胎的發育阻斷有密切關系。此外，研究人員在胚胎期內部細胞團(ICM)和滋養外胚胎層(TE)樣本中識別了數千個區域的異常變化，這可能是降低SCNT移植成功率的重要原因。資料顯示，DNA甲基化損傷可能是移植前SCNT胚胎不可避免的障礙。

　　2.WGBS胚胎中異常DNA再甲基化

　　與正常受精胚胎組發育過程不同，SCNT胚胎組出現異常甲基化水平上升現象。為了探索SCNT胚胎的潛在分子機制，研究人員比較了SCNT胚胎組和受精胚胎組之間的差異甲基化區域(DMR)，確定了廣泛的再甲基化區域(rDMR)，這種反復甲基化現象在發育受阻的克隆胚胎中更為明顯。總的來說，上述結果提高了SCNT胚胎基因組中rDMR發揮明顯障礙作用的可能性，適當去除rDMR可以挽救卵 裂階段的發育阻斷，促進胚胎發育。

　　3.Scnt胚胎的超甲基化導致轉錄組障礙。

　　WGBS廠家表示通過對SCNT胚胎的轉錄組和DNA甲基化組數據，在WGCNA(加權基因聯合表達網絡分析)的基礎上，與SCNT胚胎組相比，異常DNA超甲基化，特別是甲基化可以調節核心發育基因，從而促進SCNT胚胎的發育能力，部分逆轉錄轉座子更有可能抵抗去甲基化。

　　4.抑制DNA再甲基化可以促進SCNT胚胎的發育。

　　在不完全再甲基化與SCNT胚胎發育失敗之間產生相關性后，研究人員分析了抑制再甲基化是否能改善克隆動物的不良發育，探討了DNA甲基轉移酶(Dnmts)在早期克隆過程中對全基因組再甲基化模式的影響。結果表明，干擾Dnmts的表達可以有效降低克隆胚胎中異常DNA甲基化水平，激活克隆胚胎的特定譯本，提高克隆胚胎體內發育效率。

　　5.DNA修飾和組蛋白修飾劑的組合處理可以提高復制效率。

　  WGBS廠家表示研究人員探討了DNA修飾和組蛋白修飾的組合處理對異常DNA甲基化標記丟失后的影響，發現克隆胚胎異常DNA再甲基化和組蛋白再編程缺陷是相對獨立的兩個障礙。表明，多種表觀遺傳調節劑的組合處理可能是實現更高復制效率的較有希望的方法之一。